蛋白含量測(cè)定常用方法有哪些？

蛋白純化是目前生物研究鄰域中較為熱門的一個(gè)大方向，其中蛋白含量測(cè)定是純化過(guò)程中很重要的一項(xiàng)內(nèi)容。

zui常用的蛋白含量測(cè)定分析方法有：馬斯亮藍(lán)法（Bradford）、Folin-酚試劑法（Lowry）、BCA法等。

Folin-酚試劑法（Lowry）：蛋白質(zhì)在堿性溶液中肽鍵與Cu²⁺鰲合，形成蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物，還原酚磷鉬酸，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，藍(lán)色深淺與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系。靈敏度在1-5μg/mL，是目前zui靈敏的測(cè)定方法，但耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，操作需嚴(yán)格計(jì)時(shí)，顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)而變化，因?yàn)槠渲械木剖徕?硫酸銅試劑配置保存困難，逐漸被考馬斯亮藍(lán)法取dai。

考馬斯亮藍(lán)法（Bradford）：考馬斯亮藍(lán)G-250染料與蛋白質(zhì)結(jié)合呈藍(lán)色，在波長(zhǎng)595nm有吸收峰，在一定的范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)的含量呈線性關(guān)系。靈敏度在25-250μg/mL左右，應(yīng)用廣泛，顏色穩(wěn)定，專一性較差，干擾物質(zhì)多。

BCA法：BCA法基于雙縮脲原理，堿性條件下蛋白質(zhì)將Cu²⁺還原成Cu⁺，BCA鰲合Cu⁺作為顯色劑，產(chǎn)生藍(lán)紫色并在562nm有吸收峰，單價(jià)Cu⁺與蛋白質(zhì)呈劑量相關(guān)性。靈敏度在0.5-20μg/mL之間，用于快速檢測(cè)，抗干擾能力強(qiáng)，但受金屬螯合劑影響。

每種測(cè)定方法都不是wan美無(wú)缺的，都有其優(yōu)缺點(diǎn)，在選擇時(shí)應(yīng)考慮：

① 試驗(yàn)所要求的靈敏度和精確度；

② 蛋白質(zhì)的性質(zhì)；

③ 溶液中存在的干擾物質(zhì)；

④ 測(cè)定時(shí)所耗費(fèi)的時(shí)間等因素。

就具體情況選擇最合適的試驗(yàn)方法。