正相？反相？手性分離模式如何選擇？

哈嘍，小伙伴們，還記得上個(gè)世紀(jì)五、六十年代震驚世界的“反應(yīng)停事件"嗎？反應(yīng)停學(xué)名為沙利度胺Thalidomide，結(jié)構(gòu)見下圖，其消旋體曾被用作緩解妊娠反應(yīng)的藥物。但是后來才發(fā)現(xiàn)其中的R-型異構(gòu)體才是有效的抗嘔吐成分，可減輕妊娠e心、嘔吐等癥狀；而S-型異構(gòu)體則會(huì)導(dǎo)致嬰兒畸形，結(jié)果當(dāng)時(shí)在西德、荷蘭和日本等地區(qū)產(chǎn)生了大批的畸形兒。

隨著生物工程和生命科學(xué)的發(fā)展，科學(xué)家已經(jīng)認(rèn)識(shí)到，手性化合物例如手性藥物異構(gòu)體盡管其物理和化學(xué)性質(zhì)幾乎wan全相同，只有旋光性不同，但它們?cè)谏矬w內(nèi)的生理活性和藥理作用卻存在很大的差別。為此，制藥行業(yè)中，必須對(duì)有效成分的對(duì)映體進(jìn)行拆分，而不能將其混合物作為藥物出售。 

采用液相色譜法分離手性化合物，是目前shou選方法之一，要考慮手性柱的固定相類型、分離模式及流動(dòng)相溶劑。現(xiàn)在市面上手性固定相類型較多，手性色譜有正相分離和反相分離兩種模式，流動(dòng)相溶劑的選擇與固定相、樣品性質(zhì)、分離模式有關(guān)。今天，小編就和大家聊聊，如何選擇合適的手性分離模式。

當(dāng)樣品溶于非極性溶劑中，選擇正相分離模式。常用的流動(dòng)相組合是烷烴類和醇類。其中，醇類起到了洗脫作用，烷烴類用來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度。

烷烴類試劑，可選擇正己烷、正戊烷、異己烷、正庚烷，它們對(duì)樣品分離沒有太大影響，不會(huì)改變選擇性和分離度，選擇正己烷較多。

流動(dòng)相中的醇類，對(duì)目標(biāo)物的分離起關(guān)鍵作用，不同的醇有不同的選擇性，且隨著流動(dòng)相中醇類的比例提高，目標(biāo)峰的保留時(shí)間縮短。zui常用的醇類是乙醇和異丙醇，它們的洗脫能力是：乙醇>異丙醇。甲醇在烷烴中的溶解性不好，正己烷中甲醇的最大含量是5%。如果要在烷烴中加入甲醇，最好同時(shí)加入一定量的乙醇，提高流動(dòng)相的溶解性。

在手性色譜中，為改善目標(biāo)物的峰形，需要在流動(dòng)相中添加酸或者堿。如果目標(biāo)物是酸性化合物，往往要在流動(dòng)相中加入酸性添加劑，如三氟yi酸、乙酸、甲酸等。如果目標(biāo)物是堿性化合物，要在流動(dòng)相中加入堿性添加劑，如二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺等。酸性或堿性添加劑的加入量一般為0.1%~0.3%，最大不超過0.5%，要注意色譜柱的pH耐受范圍。

需要注意的是：

1、正相色譜柱安裝前，必須先用合適的流動(dòng)相沖洗整個(gè)儀器管路，包括進(jìn)樣器。有些試劑（如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF）會(huì)破壞手性固定相的結(jié)構(gòu)，請(qǐng)不要使用這些溶劑作為流動(dòng)相的組成部分，或者作為樣品稀釋劑。如果有無法確定的，請(qǐng)咨詢廠家。

2、色譜柱能使用純甲醇或者純乙腈作為流動(dòng)相，如果要將正己烷換成甲醇或者乙腈，或者換成其他極性溶劑，需要用純異丙醇作為溶劑充分過渡。

3、正相手性柱應(yīng)避開含水的流動(dòng)相。

溴甲ji苯異丙酸消旋體的測(cè)定

液相條件

色譜柱：Ultimate^® Cellu-J（4.6×250mm，5μm)  。 

流動(dòng)相：正己烷：乙醇：三氟yi酸（90：10：0.1）；

檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；

柱溫：25℃；

流速：1mL/min；

進(jìn)樣量：10μL；

樣品配置：1mg/mL，乙醇/正己烷（1/1）溶解。

如果樣品溶于含水極性溶劑時(shí)，選擇反相分離模式。常用的流動(dòng)相組合是有機(jī)相和水相。其中，水相用來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度，常用的水相可以是磷酸鹽緩沖液，或者是純水。有機(jī)相起到了洗脫作用，常用的有機(jī)相是乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇等，且有機(jī)相比例越高，目標(biāo)物的保留時(shí)間越短。

鹽酸達(dá)泊xi汀的測(cè)定

液相條件

色譜柱：Ultimate^® Cellu-JR（4.6×250mm，5μm)  。 

流動(dòng)相：甲醇：乙醇：二乙胺（95：5：0.1）；

檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；

柱溫：20℃；

流速：0.6mL/min；

進(jìn)樣量：5μL；

樣品配置：1mg/mL，甲醇溶解。

目前，月旭科技的手性固定相填料包括 Cellu-D、Cellu-J、Amy-D等，可以滿足絕大多數(shù)手性樣品分離需求。各位小伙伴有手性樣品分離或需要篩選柱子，歡迎聯(lián)系月旭售前技術(shù)熱線或當(dāng)?shù)劁N售。